|
|
Diferenční pulzní voltametrie pro detekci metallothioneinu
Postránecká, Tereza ; Prášek, Jan (oponent) ; Provazník, Ivo (vedoucí práce)
Metalothionein (MT) je protein s charakteristickým aminokyselinovým složením, který díky svým thiolovým skupinám dokáže vázat ionty kovů a zapojovat se tak do homeostázy těchto iontů v organismu. Protein má svůj význam i v procesu karcinogeneze, mohl by být vhodným markerem u některých typů nádorů. MT má v organismech mnoho specifických funkcí. Může být zkoumán několikerými technikami. Běžně používanou metodou stanovení koncentrace MT je elektroanalýza. Konkrétněji se v této práci zaměřuji na diferenční pulzní voltametrii za využití Brdičkovy reakce.
|
|
| |
|
|
Čipová a kapilární elektroforéza pro výzkum rakoviny
Hájková, Tereza ; Babula, Petr (oponent) ; Provazník, Ivo (vedoucí práce)
Práce se zabývá problematikou nádorového onemocnění a jeho vznikem. Karcinom prostaty je druhý nejzávažnější karcinom u mužů, je důležité zaměřit se na včasnou detekci. Tato práce pojednává o proteinech, které jsou nebo by mohly být využity jako potenciální nádorové markery. Například v současnosti běžně používaný prostatický specifický antigen, ale nově i metalothionein. Metalothionein je protein vyskytující se v rostlinné i v živočišné říši ve čtyřech základních isoformách. Existuje předpoklad, že obsah jednotlivých isoforem, případně jejich vzájemný poměr, má určitý diagnostický potenciál, který by mohl být využitelný v praxi. Z tohoto důvodu jsou vyvíjeny a studovány metody pro specifickou a citlivou analýzu jednotlivých isoforem. V této práci je pro separaci isoforem využita kapilární elektroforéza a jsou diskutovány vlivy jednotlivých parametrů (druh základního elektrolytu, jeho pH, velikost separačního napětí a tak dále) na výslednou separaci.
|
|
|
Zpracování elektrochemických signálů metalotioneinu z Brdičkovy reakce
Dvořáček, Jiří ; Hynek, David (oponent) ; Valla, Martin (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá problematikou průběhu Brdičkovy elektrochemické reakce a možnostmi jejího popisu a zpracování naměřeného katalytického signálu. První část práce se zabývá úvodem do problematiky, samostatným vznikem této reakce, objevení vlastností metalotioneinu, funkcí v lidském těle, možnostmi popisu a aplikací shlukové analýzy na naměřený elektrochemický signál metalotioneinu z Brdičkovy reakce a detekci zvoleného vrcholu. V druhé části je na základě požadavků zhotoven program umožňující vyhodnocení Brdičkovy reakce pracující na základě dvou detekcí z načteného signálu.
|
|
|
Potenciální vliv tkáňově specifických transkripčních faktorů na expresi metalothioneinů
Michálková, Nikola
Metalothioneiny představují skupinou intracelulárních proteinů, které jsou schopné vázat kovové ionty a jejich funkce zahrnuje regulaci buněčných hladin těchto kovových iontů. Transkripční faktory jsou centrálními regulátory genové exprese a hrají důležitou roli v regulaci genové exprese metalothioneinů, která představuje základní mechanismus pro buněčnou odpověď na změny hladin kovových iontů. Ačkoli jsou známy transkripční faktory, které se vážou na oblasti promotoru metalothioneinů, jejich role při bazální a indukované genové expresi metalothioneinů není zcela objasněna. Předmětem této diplomové práce byla indukce genové exprese metalothioneinů pomocí zinečnatých iontů u buněčných nádorových linií HUH7 (hepatocelulární karcinom) a T47D (karcinom prsu), a následná analýza genové exprese vybraných transkripčních faktorů. Volba transkripčních faktorů byla provedena na základě analýzy TF ChIP-seq dat z databáze ENCODE. Pro experimentální část byly zvoleny transkripční faktory FOXA1, FOXA2, HNF4A, a HNF4G, jejichž vysoké hladiny jsou typické pro jaterní tkáň. Dále byla sledována genová exprese ubikvitárních transkripčních faktorů JUND, NR3C1, RXRA, STAT3, SP1 a MTF1. Statisticky signifikantní změny v genové expresi (RT-qPCR) po krátkodobé expozici (4-6 h) 100 μM ZnSO4 byly pozorovány u FOXA1, JUND a MTF1. V případě FOXA1 byl u obou nádorových linií sledován pokles genové exprese v porovnání s kontrolou, u JUND a MTF1 naopak nárůst exprese po aplikaci ZnSO4. V případě MTF1 byl pozorován signifikantní narůst pouze u nádorové linie HUH7. Výsledky naznačují, že vedle validovaného zinek-responzivního transkripčního faktoru MTF1, by se mohly podílet na regulaci genové exprese metalothioneinů i transkripční faktory FOXA1 a JUND. FOXA1 by mohl představovat potenciální represor a JUND induktor exprese metalothioneinů v reakci na zvýšenou expozici zinečnatým iontům.
|
|
|
Study the optimal condition to knockout metallothionein by CRISPR-Cas9 in neuroblastoma
Májková, Klára
Při léčbě neuroblastomu (Nbl), embryonálního nádoru, který nejčastěji postihuje kojence a děti mladší pěti let, se často používají léčebné strategie založené na cisplatině. Bylo však zjištěno, že účinnost těchto strategií je nižší než 50 % v důsledku chemorezistence nádorových buněk. Tato rezistence byla spojena se zvýšenou expresí metalothioneinů (MTs) v buňkách neuroblastomu. Lidský metalothionein 3 (hMT-3), protein exprimovaný především v buňkách centrální nervové soustavy, hraje zásadní roli v detoxikaci kovů a udržování homeostázy během oxidačního stresu. Knock out metalothioneinu 3 pomocí CRISPR/Cas9 by proto mohl buňky opět učinit citlivými na cytotoxická léčiva. Cílem této studie bylo optimalizovat podmínky pro úspěšné vyřazení MT3 z neuroblastomu. Plazmid MT3-CRISPR/Cas9 byl transfekován do neuroblastomu pomocí přípravku Lipofectamine 2000 ve třech různých koncentracích (250 ng/µl, 500 ng/µl a 1000 ng/µl). Optimálních podmínek bylo dosaženo při použití 0,75 µl přípravku Lipofectamine, 1000 ng/µl plazmidu a 0,5 ng/µl puromycinu.
|
|
|
Vliv expozice těžkých kovů na expresi mRNA isoforem metalothioneinu u adherentních buněčných linií
Jordanová, Lucie
Metalothionein je malý protein bohatý na cystein, který hraje důležitou roli v homeostáze kovů a ochraně před toxicitou těžkých kovů, poškozením DNA a oxidačním stresem. Bakalářská práce byla provedena za účelem zjištění vlivu expozice těžkých kovů na expresi mRNA isoforem metalothioneinu u adherentních buněčných linií. Byl zkoumán vliv expozice zinku ve formě ZnSO4 na expresi mRNA isoforem MT-1A, MT-1X a MT-2A u adherentních buněčných linií rakoviny prsu MCF-7, MDA-MB-231 a T-47D. Pomocí MTT testu viability je zjištěno, jak se mění viabilita buněk při různých koncentracích ZnSO4 a pomocí denaturačního agarózového gelu je ověřena integrita RNA. Pro studium hladin mRNA je využita polymerázová řetězová reakce v kombinaci s reverzní transkripcí qRT-PCR.
|
|
|
Vliv taurinu na biochemické ukazatele v orgánech laboratorních potkanů
Mrázková, Martina
Cílem diplomové práce bylo zhodnotit vliv různých hladin taurinu na antioxidační status organismu laboratorních potkanů. Sledovat koncentraci taurinu a jednotlivých aminokyselin ve vybraných orgánech. Diplomová práce hodnotí vliv taurinu v játrech a mozku laboratorních potkanů, po jeho aplikaci v krmých směsích. Byl sledován vliv taurinu na poměr GSH/GSSG, koncentraci taurinu a metalothioneinu. Do pokusu bylo použito 48 samců potkanů druhu Wistar, kteří byli rozděleni do osmi skupin (n=6). Během čtyř týdnů, byly potkanům podávány krmné směsi obohaceny o taurin v dávce 0, 1000, 1500, 2000 2500, 3000, 3500 a 4000 mg/kg/diety. Zvířata příjmala dietu a pitnou vodu ad libidum. Průměrná spotřeba krmné směsi za den byla 35 g. Aplikací taurinu došlo ke zvýšení koncentrace taurinu v organismu, což pozitivně působí na antioxidační mechanismy organismu. Ovšem nemůžeme potvrdit, že doplnění taurinu do diety ovlivňuje koncentrace metalothioneinu a glutathionu v organismu. V mozku byla zjištěn zvýšený poměru GSH/GSSG a snížení koncentrace metalothioneinu. Naopak tomu bylo v játrech, kdy došlo ke snížení poměru GSH/GSSG a zvýšení koncentrace metalothioneinu.
|
|
|
Charakterizace metalothioneinu pomocí kapilární elektroforézy
Drncová, Marie
Bakalářská práce je zaměřena na studium metalothioneinu (MT), nízkomolekulárního, na cystein bohatého proteinu, jehož přítomnost byla potvrzena napříč rozličnými organismy jako bakterie, plísně, rostliny, bezobratlí a obratlovci. Doposud byly u savců popsány jeho čtyři isoformy. Ze schopnosti MT vázat do své struktury ionty kovů vyplývají i jeho funkce v celé řadě fyziologických a patologických procesů v živých systémech jako ovlivňování homeostáze iontů kovů, zachování oxidačně-redukčního prostředí, detoxikace a transport iontů kovů a regulace genové exprese. Stále častěji je diskutována souvislost mezi MT a neurodegenerativními onemocněními či karcionomy. Cílem této práce bylo vytvoření uceleného přehledu biochemických, analytických a funkčních charakteristik MT se zaměřením na neurodegenerativní onemocnění. Experimentální část byla věnována optimalizaci metody separace dílčích isoforem a kvalitativní i kvantitativní analýze vazebných vlastností MT k vybraným iontům kovů pomocí kapilární elektroforézy.
|
|
|
Izolace, separace a studium významných kov-vazných proteinů
Skaličková, Sylvie
Kov-vazné proteiny jsou významnou skupinou biomolekul v živých organismech. Zastupují zde mnoho životně důležitých funkcí jako je udržení homeostázy esenciálních kovů v organismu, podílejí se na detoxifikaci těžkými kovy, pomáhají antioxidačnímu systému vyrovnat se s volnými radikály způsobujícími oxidační stres. Řada z nich patří do skupiny životně důležitých enzymů, katalyzující biochemické reakce. Mimo jiné jsou kov-vazné proteiny součástí vrozené imunity pro boj proti patogenním bakteriím a také jsou výbornými transportéry nejen pro esenciální molekuly, ale mohou být využity pro cílený transport ve velmi rozvíjející se oblasti, nanomedicíny. Existuje řada metod, jak lze tyto specifické proteiny studovat a sledovat jejich interakce s dalšími biomolekulami. Mezi základní metody patří kapalinová chromatografie, která umožňuje jejich izolaci z biologických vzorků, dále byly v této práci použity imunochemické metody, spektrofotometrické metody a elektrochemické metody, pomocí kterých lze objasnit chování a vlastnosti těchto molekul v různém prostředí. Cílem předkládané práce bylo optimalizovat metody pro separaci a studium kov-vazných proteinů.
|
host ::
RSS.